1、空氣空白水空白：一般是用于儀器調(diào)零的,所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值。

    2、底物空白：一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高，同樣所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值（只加底物和終止液）

    3、酶空白：一般在2步法實(shí)驗(yàn)中使用，主要是看酶是否和板有非特異性結(jié)合的，一般不做這個(gè) 。

 

   ELISA空白孔一般設(shè)一個(gè)，這是為了減除顯色液的OD值。而陰性和陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品是設(shè)2個(gè)復(fù)孔，雖然有點(diǎn)浪費(fèi)，但為了確保實(shí)驗(yàn)的可靠性，我認(rèn)為還是很有必要的。ELISA空白孔加什么？一般兩個(gè)做法，看個(gè)人習(xí)慣或者說(shuō)看你們實(shí)驗(yàn)室的習(xí)慣：

    1、什么都不加，然后那個(gè)孔按照操作流程來(lái)做，這個(gè)說(shuō)法的根據(jù)就是空白，也就是什么都沒(méi)有。

    2、加樣本稀釋液，然后按照操作流程來(lái)做。這個(gè)做法的根據(jù)就是只要不含陽(yáng)性物質(zhì)就算是空白的，加入樣本稀釋液的目的是為了使這個(gè)孔除了在沒(méi)有陽(yáng)性物質(zhì)上其他的都與其他孔一致。

 

   怎麼控制顯色時(shí)間？

    顯色時(shí)間要通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)找到所測(cè)所有sample的顯色OD在0.1到2.0的有效range間，我用過(guò)OPD solution，一般incubation for 15min at RT，測(cè)一次然后立即加入stop solution 在測(cè)一次。